ポリアクリルアミドゲル電気泳動とは何ですか?

ポリアクリルアミドゲル電気泳動

ゲル電気泳動は、生物学分野全般の研究室における基本的な技術であり、DNA、RNA、タンパク質などの巨大分子の分離を可能にします。さまざまな分離媒体とメカニズムにより、これらの分子の物理的特性を利用して、これらの分子のサブセットをより効果的に分離できます。特にタンパク質の場合、ポリアクリルアミドゲル電気泳動 (PAGE) がよく選ばれる技術です。

PAGE は、電気泳動移動度、つまり分析対象物が逆の電荷の電極に向かって移動する能力に基づいてタンパク質などの高分子を分離する技術です。PAGE では、これは分子の電荷、サイズ (分子量)、および形状によって決まります。検体はポリアクリルアミドゲルに形成された細孔を通って移動します。DNA や RNA とは異なり、タンパク質は組み込まれるアミノ酸に応じて電荷が異なり、タンパク質の動作に影響を与える可能性があります。アミノ酸のひもは、見かけのサイズに影響を与える二次構造を形成することもあり、その結果、アミノ酸が細孔を通過する方法に影響を与えます。したがって、より正確なサイズの推定が必要な場合は、電気泳動の前にタンパク質を変性して直線化することが望ましい場合があります。

SDSページ

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動は、質量 5 ～ 250 kDa のタンパク質分子を分離するために使用される技術です。タンパク質は分子量のみに基づいて分離されます。アニオン性界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウムは、タンパク質サンプルの固有電荷をマスクし、同様の電荷対質量比を与えるゲルの調製時に添加されます。簡単に言うと、タンパク質を変性させ、マイナスの電荷を与えます。

ネイティブページ

ネイティブ PAGE は、タンパク質の分離に非変性ゲルを使用する技術です。SDS PAGE とは異なり、ゲルの調製時に変性剤は追加されません。その結果、タンパク質の分離はタンパク質の電荷とサイズに基づいて行われます。この技術では、タンパク質の立体構造、折り畳み、アミノ酸鎖が分離に依存する要因となります。この際、タンパク質は損傷を受けず、分離完了後に回収することが可能です。

ポリアクリルアミドゲル電気泳動 (PAGE) はどのように機能しますか?

PAGE の基本原理は、電流を使用して分析対象物をポリアクリルアミド ゲルの細孔に通過させて分離することです。これを達成するには、アクリルアミドとビスアクリルアミドの混合物に過硫酸アンモニウム (APS) を加えて重合させます (ポリアクリルアミド)。この反応はテトラメチルエチレンジアミン (TEMED) によって触媒され、分析対象物が通過できる細孔を備えた網状構造を形成します (図 2)。ゲルに含まれる総アクリルアミドの割合が高くなると、細孔サイズが小さくなり、通過できるタンパク質が小さくなります。アクリルアミドとビスアクリルアミドの比率も細孔サイズに影響しますが、多くの場合、これは一定に保たれます。細孔サイズが小さいと、小さなタンパク質がゲル内を移動できる速度も低下し、分解能が向上し、電流が印加されたときにタンパク質がバッファーに急速に流れ出すのを防ぎます。

ポリアクリルアミドゲル電気泳動装置

ゲル電気泳動セル（タンク/チャンバー）
ポリアクリルアミドゲル電気泳動（PAGE）用のゲルタンクはアガロースゲルタンクとは異なります。アガロースゲルタンクは水平型ですが、PAGE タンクは垂直型です。垂直電気泳動セル (タンク/チャンバー) では、薄いゲル (通常 1.0 mm または 1.5 mm) を 2 枚のガラス板の間に注ぎ、一方のチャンバーではゲルの底部が緩衝液に浸され、上部が緩衝液に浸されるように取り付けます。別の部屋で。電流が印加されると、少量の緩衝液がゲルを通って上部チャンバーから下部チャンバーに移動します。アセンブリが直立位置に留まるようにするための強力なクランプを備えたこの装置は、均一な冷却による迅速なゲルの実行を促進し、その結果、明確なバンドが得られます。

北京 Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) は、さまざまなサイズのポリアクリルアミドゲル電気泳動セル (タンク/チャンバー) を製造しています。モデル DYCZ-20C および DYCZ-20G は、DNA シーケンス解析用の縦型電気泳動セル (タンク/チャンバー) です。一部の垂直電気泳動セル (タンク/チャンバー) は、モデル DYCZ-24DN、DYCZ-25D、DYCZ-25E などのブロッティング システムと互換性があり、ウェスタンブロッティング システム モデル DYCZ-40D、DYCZ-40G、DYCZ-40F と互換性があります。タンパク質分子をゲルから膜に転写するために使用されます。SDS-PAGE 電気泳動後、ウェスタンブロッティングは、タンパク質混合物中の特定のタンパク質を検出する技術です。実験要件に応じて、これらのブロッティング システムを選択できます。

電気泳動電源
ゲルを実行するための電力を供給するには、電気泳動電源が必要です。Liuyi Biotechnology では、あらゆるアプリケーション向けにさまざまな電気泳動電源を提供しています。モデル DYY-12 および DYY-12C は、高い安定した電圧と電流を備えており、高電圧要求の電気泳動に対応できます。スタンド、タイミング、VH、ステップバイステップアプリケーションの機能があります。これらは、IEF および DNA シーケンシング電気泳動アプリケーションに最適です。一般的なタンパク質や DNA の電気泳動用途には、DYY-2C、DYY-6C、DYY-10 などのモデルがあり、これらも電気泳動セル (タンク/チャンバー) を備えた売れ筋の電源です。これらは、学校の研究室や病院の研究室などの中電圧および低電圧の電気泳動アプリケーションに使用できます。電源のその他のモデルについては、当社の Web サイトをご覧ください。

Liuyiブランドは中国で50年以上の歴史があり、安定した高品質の製品を世界中に提供できます。長年の開発を通じて、あなたの選択に値します。

当社に関する詳細については、メールでお問い合わせください[メールで保護されています] or [メールで保護されています].

ポリアクリルアミドゲル電気泳動とは何ですか?の参考文献
1. Karen Steward PhD ポリアクリルアミドゲル電気泳動、その仕組み、テクニックのバリエーション、およびその応用