先週、酢酸セルロース膜電気泳動を使用する際のいくつかの考慮事項を共有しましたが、参考のために今日はこのトピックをここで終了します。
の選択 緩衝液濃度
酢酸セルロース膜電気泳動で使用される緩衝液濃度は、一般に紙電気泳動で使用される緩衝液濃度よりも低くなります。一般的に使用されるpH 8.6B任意の緩衝液は通常、0.05 mol/L ～ 0.09 mol/L の範囲内で選択されます。濃度を選択する際には、事前の決定が行われます。たとえば、電気泳動チャンバー内の電極間の膜ストリップの長さが 8 ～ 10 cm の場合、膜の長さ 1 センチメートルあたり 25 V の電圧が必要で、電流強度は膜の幅 1 センチメートルあたり 0.4 ～ 0.5 mA でなければなりません。電気泳動中にこれらの値が達成されない、または超えた場合は、バッファー濃度を増やすか希釈する必要があります。
バッファー濃度が低すぎると、バンドの動きが急速になり、バンド幅が増加します。一方、バッファー濃度が高すぎるとバンドの移動が遅くなり、特定の分離バンドを区別することが困難になります。
酢酸セルロース膜電気泳動では、電流の大部分がサンプルに伝導され、かなりの量の熱が発生することに注意してください。場合によっては、選択した緩衝液濃度が適切であると考えられる場合があります。ただし、環境温度が上昇したり、より高い電圧を使用したりすると、熱による水の蒸発が激しくなり、バッファー濃度が過度に高くなり、メンブレンが乾燥する場合もあります。
サンプル量
酢酸セルロース膜電気泳動では、サンプル量は電気泳動条件、サンプル自体の性質、染色方法、検出技術などのさまざまな要因によって決まります。一般原理として、検出方法の感度が高ければ高いほど、サンプル量を少なくすることができ、分離に有利になります。サンプル量が多すぎると、電気泳動による分離パターンが不鮮明になる可能性があり、染色にも時間がかかる可能性があります。ただし、溶出比色検出法を使用して分離された染色バンドを定量分析する場合、サンプル量が少なすぎてはなりません。これは、特定の成分の吸光度値が低下し、その含有量の計算における誤差が大きくなる可能性があるためです。このような場合には、サンプル量を適切に増やす必要があります。
通常、サンプル塗布ラインの 1 センチメートルごとに追加されるサンプル量は 0.1 ～ 5 μL の範囲であり、これは 5 ～ 1000 μg のサンプル量に相当します。たとえば、日常的な血清タンパク質電気泳動分析では、アプリケーションラインの各センチメートルに追加されるサンプル量は一般に 1 μL を超えず、これはタンパク質 60 ～ 80 μg に相当します。ただし、同じ電気泳動法を使用してリポタンパク質または糖タンパク質を分析する場合、それに応じてサンプル量を増やす必要があります。
結論として、最適なサンプル量は、一連の予備実験を通じて特定の条件に基づいて選択する必要があります。
染色液の選択
酢酸セルロース膜電気泳動で分離されたバンドは、通常、検出前に染色されます。異なるサンプル成分には異なる染色方法が必要であり、酢酸セルロース膜電気泳動に適した染色方法が濾紙には完全には適用できない場合があります。
染色液の選択には3大原則があります酢酸セルロース膜。まず、アルコール可溶性染料の染色溶液によって引き起こされる膜の収縮や変形を避けるために、水溶性染料をアルコール可溶性染料よりも優先する必要があります。染色後はメンブレンを水ですすぎ、染色時間を最小限に抑えることが重要です。そうしないと、メンブレンがカールしたり縮んだりして、その後の検出に影響を与える可能性があります。
第二に、サンプルに対して強い染色親和性を持つ染料を選択することが好ましい。血清タンパク質の酢酸セルロース膜電気泳動では、さまざまな血清タンパク質成分に対する強い染色親和性と安定性により、アミノブラック 10B がよく使用されます。
第三に、信頼できる品質の染料を選択する必要があります。一部の染料には、名前が同じであっても、染色後の背景が特に暗くなる不純物が含まれている場合があります。これにより、元々十分に分離されていたバンドがぼやけてしまい、区別が難しくなる場合もあります。
最後に、染色液の濃度の選択が重要です。理論的には、染色溶液の濃度が高いほど、サンプル成分がより徹底的に染色され、より良い染色結果が得られるように思われるかもしれません。しかし、そうではありません。サンプル成分と色素間の結合親和性には一定の限界があり、染色液の濃度が増加しても増加しません。逆に、染色液の濃度が高すぎると、染料が無駄になるだけでなく、鮮明な背景を得ることが困難になります。さらに、色の強度が特定の最大値に達すると、染料の吸光度曲線は、特に定量的測定において直線関係に従いません。酢酸セルロース膜電気泳動では、染色液の濃度は一般に紙電気泳動で使用されるものよりも低くなります。
北京Liuyi Biotechnologyについて知っておくべき詳細's 酢酸セルロース膜電気泳動タンクとその電気泳動アプリケーションについては、こちらをご覧ください。
私酢酸セルロース膜電気泳動を使用する場合は、いくつかの考慮事項に留意する必要があります (1)
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参照：電気泳動(第2版) 李氏
投稿時間: 2023 年 6 月 6 日