DNA ゲル電気泳動は、サイズに基づいて DNA 断片を分離および分析するために使用される一般的な分子生物学の技術です。このプロセスには、紅藻類に含まれる炭水化物であるアガロースでできたゲルに、さまざまなサイズの DNA 断片をロードすることが含まれます。
アガロースゲルの準備とキャスト
- アガロースを適量の電気泳動バッファーに溶解します。ゲルの濃度は、質量対体積比によって決まります。たとえば、100 に対して 1 g のアガロースです。ml 1%ゲル用の緩衝液。
- 混合物を電子レンジで加熱し、容器を回転させてアガロースが完全に溶解するようにします。
- 臭化エチジウムをゲル溶液に最終濃度 0.5 になるまで加えます。mg/ ml。エチジウムブロマイドは、隣接する DNA 塩基対の間に挿入され、UV 光の下でオレンジ色の蛍光を発します。エチジウムブロマイドは発がん性物質であるため、取り扱いには手袋の着用などの適切な安全対策が必要であることに注意してください。
- 高温によるゲルトレイの反りを防ぐために、ゲル溶液を水浴で冷却します。
- ゲル溶液にコームを入れてサンプルウェルを形成します。ロードする DNA サンプルの量に適したコームを選択してください。アガロースゲル溶液をゲルトレイそして室温で固化させます。
- ジェルが固まったらコームを外します。ジェルをすぐに使用しない場合は、ラップに包み、使用するまで4℃で保管してください。
ゲルの準備と実行
電気泳動を開始する前に、DNA サンプルをローディングバッファーと混合します。ローディングバッファーは通常 6 倍濃縮されており、サンプルがウェルの底に沈み、電気泳動中の動きを追跡するのに役立ちます。
電源を規定の電圧に設定してください。
ゲルの表面を覆うのに十分な量の電気泳動バッファーをゲルタンクに追加します。確保する正しい電極接続を行ってください。
DNA サンプルと分子量マーカーをゲルウェルにロードします。
電源をオンにして電気泳動を開始します。
分離したDNA断片の観察
電気泳動後は電源を切り、ゲルを除去してください。
UV 光源を使用してゲルを照らします。DNA 断片はオレンジ色の蛍光バンドとして表示されます。
分離された DNA 断片を分析するためにゲル画像を文書化します。
実験後は、実験室のガイドラインに従って、ゲルと電気泳動バッファーを適切に廃棄してください。臭化エチジウムを含むゲルやバッファーを取り扱うときは、この有害物質への暴露を防ぐために常に手袋を着用してください。
DNA ゲル電気泳動は、DNA 分子サイズの推定、DNA 断片の分離、遺伝子変異の検出、DNA フィンガープリンティングなどの用途のために、分子生物学および遺伝学の研究で広く使用されています。これは、DNA サンプルの組成と特性を理解するのに役立つ、シンプルで効果的な実験手法です。
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投稿時間: 2023 年 8 月 8 日