進化し続ける分子生物学の分野では、ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) とゲル電気泳動が、DNA の研究と操作を容易にする基礎技術として登場しました。これらの方法論は研究に不可欠であるだけでなく、診断、法医学、バイオテクノロジーにも広く応用されています。
写真はウェブサイトbiology4alevelより
PCR は 1983 年に Kary Mullis によって開発された革新的な技術で、科学者はこれを使用して特定の DNA セグメントを指数関数的に増幅できます。このプロセスは DNA の変性から始まり、二本鎖 DNA が約 94°C に加熱され、2 本の一本鎖に分離されます。続いてアニーリングが行われ、プライマー (ヌクレオチドの短い配列) が低温 (通常は約 55℃) で一本鎖 DNA 上の相補配列に結合します。最後に、伸長段階が 72°C で起こり、酵素 DNA ポリメラーゼがプライマーにヌクレオチドを追加することによって新しい DNA 鎖を合成します。このサイクルは 20 ~ 40 回繰り返され、標的 DNA 配列の数百万コピーが生成されます。
DNA が増幅されたら、ゲル電気泳動を使用して PCR 産物を分離および分析します。この技術には、電場の影響下でアガロースゲルマトリックスを通過する DNA フラグメントの移動が含まれます。 DNA 分子はリン酸骨格により負に帯電しており、正極に向かって移動します。ゲルはふるいとして機能し、小さな DNA 断片が大きな DNA 断片よりも速く移動できるようにします。その結果、DNA 断片はサイズに基づいて分離され、臭化エチジウムなどの色素で染色した後、紫外線下で明確なバンドが見えるようになります。
PCR とゲル電気泳動の組み合わせは、多くの用途で強力です。医療診断では、PCR は病原体の存在、遺伝子変異、または疾患に関連する特定の DNA 配列を検出するために使用されます。ゲル電気泳動により、これらの増幅された DNA 断片を視覚化して確認することができます。法医学では、これらの技術は DNA フィンガープリンティングにとって非常に重要であり、犯罪現場の DNA サンプルと容疑者の DNA サンプルを照合するのに役立ちます。
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投稿日時: 2024 年 8 月 15 日