導入
ゲル電気泳動は分子生物学の基本的な技術であり、タンパク質、核酸、その他の巨大分子の分離に広く使用されています。正確で再現性のある結果を得るには、サンプル量、電圧、電気泳動時間を適切に制御することが重要です。私たちの研究室の同僚が提案しますSDS-PAGE ゲル電気泳動中にこれらのパラメーターを管理するためのベスト プラクティス。
北京Liuyi Biotechnologyのゲル電気泳動製品
サンプル量: 一貫性の確保
SDS-PAGE 電気泳動を実行する場合、サンプル量は結果の分解能に大きな影響を与える重要な要素です。一般に、ウェルあたり 10 μL の総タンパク質をロードすることが推奨されます。一貫性を確保し、隣接するウェル間でのサンプルの拡散を防ぐために、空のウェルに等量の 1x ローディングバッファーをロードすることが重要です。この予防措置は、ウェルが空のままの場合に発生する可能性のある、隣接するレーンへのサンプルの拡散を防ぐのに役立ちます。
サンプルをロードする前に、必ず分子量マーカーを 1 つのウェルに追加することから始めます。これにより、電気泳動後のタンパク質のサイズを簡単に識別できます。
電圧制御: 速度と分解能のバランスをとる
電気泳動中に印加される電圧は、サンプルがゲルを通過する速度と分離の分解能の両方に直接影響します。 SDS-PAGE の場合は、約 80V の低電圧から始めることをお勧めします。この初期の低電圧により、サンプルはゆっくりと均一に移動し、分離ゲルに入るときにサンプルが鋭いバンドに集中します。
サンプルが分離ゲルに完全に入ったら、電圧を 120V まで上げることができます。このより高い電圧により移動が加速され、タンパク質が分子量に応じて効率的に分離されます。電気泳動の完了を示すブロモフェノールブルー色素フロントの進行を監視することが重要です。濃度 10 ～ 12% のゲルの場合、通常は 80 ～ 90 分で十分です。ただし、15% ゲルの場合は、実行時間をわずかに延長する必要がある場合があります。
時間管理: いつ停止するかを知る
ゲル電気泳動ではタイミングも重要な要素です。ゲルの実行時間が長すぎたり短すぎたりすると、最適な分離が得られない可能性があります。ブロモフェノール ブルー色素の移動は有用な指標です。ブロモフェノール ブルー色素がゲルの底に到達すると、通常は泳動を停止する時期となります。 10 ～ 12% などの標準的なゲルの場合、電気泳動時間は通常約 80 ～ 90 分で十分です。 15% など、ゲルのパーセンテージが高い場合は、タンパク質を完全に分離するために分析時間を延長する必要があります。
バッファ管理: バッファの再利用と準備
電気泳動バッファーは、研究室の特定の条件に応じて 1 ～ 2 回再利用できます。ただし、最適な結果を得るには、新鮮な 10x バッファーを調製し、使用直前に希釈することをお勧めします。これにより、バッファーの有効性が確実に維持され、より信頼性の高い電気泳動結果が得られます。
北京Liuyi Biotechnologyのゲル電気泳動製品
サンプル量、電圧、電気泳動時間を注意深く制御することにより、ゲル電気泳動結果の精度と再現性を大幅に向上させることができます。研究室での作業にこれらのベスト プラクティスを実装すると、より明確で明確なバンドを実現し、下流の分析に適したデータを得ることができます。
ゲル電気泳動実験を最適化するためのより良い方法がある場合は、ぜひご相談ください。
北京 Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) は、独自の専門技術チームと研究開発センターを擁し、50 年以上にわたり電気泳動装置の製造に特化してきました。設計から検査、倉庫に至るまで信頼性の高い充実した生産ラインとマーケティングサポートを行っております。当社の主な製品は、電気泳動セル（タンク/チャンバー）、電気泳動電源、青色LEDトランスイルミネーター、UVトランスイルミネーター、ゲル画像および分析システムなどです。また、PCR装置、ボルテックスミキサー、ラボ用遠心分離機などのラボ機器も供給しています。
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投稿日時: 2024 年 8 月 20 日