酢酸セルロース膜電気泳動による血清タンパク質の分離実験

原理

セルロースアセテートフィルム電気泳動は、セルロースアセテートフィルムを支持体として用いた電気泳動法です。電場の作用により荷電粒子が反対の電極に向かって移動する現象を電気泳動といいます。各タンパク質には特定の等電点があるため、等電点よりも低い pH の溶液中にタンパク質を置くと、タンパク質は正に帯電し、負極に向かって移動します。逆に正極に移動します。電場中を移動するタンパク質分子の速度は、その電荷、分子の形状、サイズに関係しているため、電気泳動によってさまざまなタンパク質を分離できます。血清にはさまざまなタンパク質が含まれており、それらの等電点はすべて pH7.5 以下にあります。電気泳動を行うために血清を pH 8.6 の緩衝液に入れると、すべての血清タンパク質がマイナスに帯電し、電場内でプラス側に向かって移動します。さまざまな血清タンパク質は同じ pH でも電荷が異なるため、分子粒子のサイズが異なり、移動速度も異なり、電気泳動によって分離されます。血清タンパク質の等電点と分子量を以下の表に示します。

この実験は、酢酸セルロース膜 (略称 CAM) を支持体として用いて、血清中のさまざまなタンパク質を分離することです。 CAMは発泡トイレの一種ですe均一性の良いフィルムで、厚さは0.1mm〜1.5mmで、ある程度の吸水性があります。

CAM電気泳動用の材料、器具、試薬

サンプル:健康な人の血清

楽器：電源 DYY-6C、電気泳動タンク DYCP-38C、優れたサンプルローディング WD-9404

試薬

1) 酢酸セルロース膜 7X9cm

2) PH 8.6 バルビトール緩衝液 (イオン強度 0.05 ～ 0.09、0.06 時間です。): ジエチルバルビツール酸 1,84g を取り、次にジエチル ペントバルビタール ナトリウム 1.03g を取り、蒸留水を加えて加熱して溶解し、作ります。 1000mlまで;

3) 汚れ: ポンソーS 0.2g、トリクロロ酢酸 3g、蒸留水100mlを加えます。

４）ＴＢＳ／ＴまたはＰＢＳ／Ｔ：４５ｍｌの９５％エタノール、５ｍｌの氷酢酸、５０ｍｌの蒸留水を加える。

5) 洗浄液: 無水エタノール 70ml、氷酢酸 30ml。

実験方法d

1) メンブレンの準備: メンブレンをバルビトール緩衝液に 30 分～8 時間浸漬し、取り出して余分な溶液を吸収紙で取り除きます。

2) サンプルのロード: メンブレンの粗い面と平滑な面を区別し、粗い面の上端から 1.5 cm の距離に線を引きます。優れたサンプルローディングツールを使用して粗い面にサンプルをロードします。注: サンプルはメンブレンの粗い面にロードする必要があります。血清サンプルがメンブレンに完全に浸透したら、メンブレンを裏返し、（サンプルが入っている）粗い面をタンクに向けて置き、サンプルが入っている側を陰極に置きます。

3) 電気泳動: 電源をオンにします。0.4～0.6m A/cm 膜、実行時間は 30 ～ 45 分です。電気泳動後は電源を切ります。

4) 汚れと洗浄: メンブレンをタンクから取り出し、浸漬します。it 染料溶液に5分間浸し、その後、背景の色が透明になるまで洗浄溶液で3〜4回繰り返し洗浄します。血清タンパク質はバンド上に表示され、通常は上端からマークラインまで、アルブミン、α1-グロウリン、α2-グロウリン、β-グロウリン、γ-グロウリンの5つのゾーンがあります。

5) 保存: 乾燥電気泳動を入れるバンド洗浄液に10〜15分間浸し、取り出して清潔なガラスに貼り付けます。乾燥後、透明なフィルムになります。バンド.

実験結果

血清サンプルの分離効果が良好で、バンドテーリング現象がありません。結果の再現性は試験手順や実験者の方法によって異なりますが、再現性は高いです。

結論

迅速臨床電気泳動検出システム (電気泳動槽DYCP-38C、電源当社製DYY-6Cと優れたサンプルローディングWD-9404)会社名 北京流儀生物技術有限公司実験要件を満たしており、そして結果は再現可能で、シンプルかつ高速で、次の用途に適しています。教える研究.

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