コメットアッセイ (単一細胞ゲル電気泳動、SCGE) は、主に個々の細胞の DNA 損傷と修復を検出するために使用される高感度かつ迅速な技術です。 「コメットアッセイ」という名前は、結果に現れる彗星のような特徴的な形状に由来しています。細胞の核が「頭」を形成し、損傷した DNA 断片が移動して彗星のような「尾」を形成します。
原理
コメットアッセイの原理は、電場における DNA 断片の移動に基づいています。無傷の DNA は細胞核内に残りますが、損傷または断片化した DNA は陽極に向かって移動し、彗星の「尾」を形成します。尾の長さと強度は、DNA 損傷の程度に直接比例します。
手順
- 細胞の準備: 試験対象の細胞を低融点アガロースと混合し、顕微鏡スライド上に広げて均一な層を形成します。
- 細胞溶解: スライドを溶解溶液に浸して細胞膜と核膜を除去し、DNA を露出させます。
- 電気泳動: スライドはアルカリ性または中性条件下の電気泳動チャンバーに置かれます。損傷した DNA 断片は、電場の影響を受けて正極に向かって移動します。
- 染色: 電気泳動後、スライドを蛍光色素 (臭化エチジウムなど) で染色して DNA を視覚化します。
- 顕微鏡分析：蛍光顕微鏡や専用ソフトを使用して彗星の形状を解析し、尾長や強度などのパラメータを測定します。
バイオレンダーからの画像
データ分析
Comet アッセイの結果は、いくつかの重要なパラメーターに基づいて評価されます。
- 尾の長さ：DNAが移動する距離を表し、DNA損傷の程度を示します。
- 尾部 DNA 含有量: 尾部に移動する DNA の割合。DNA 損傷の定量的尺度としてよく使用されます。
- オリーブテールモーメント(OTM): 尾部の長さと尾部の DNA 含有量の両方を組み合わせて、DNA 損傷のより包括的な測定値を提供します。
アプリケーション
- 遺伝毒性研究: コメットアッセイは、細胞 DNA に対する化学物質、薬剤、放射線の影響を評価するために広く使用されており、遺伝毒性試験の重要なツールとなっています。
- 環境毒性学：環境汚染物質が生物の DNA に及ぼす影響を分析するのに役立ち、生態系の安全性についての洞察が得られます。
- 医学および臨床研究: コメット アッセイは、DNA 修復メカニズム、がん、その他の DNA 関連疾患の研究に使用されます。また、放射線療法や化学療法などのがん治療が DNA に及ぼす影響も評価します。
- 食品と農学: 殺虫剤、食品添加物、その他の物質の安全性を評価し、動物モデルでそれらの毒性影響を研究するために使用されます。
利点
- 高感度: 低レベルの DNA 損傷を検出できます。
- 簡単な操作: この技術は簡単なので、ハイスループットスクリーニングに適しています。
- 幅広い用途：動物細胞や植物細胞など様々な細胞種に適用可能です。
- 定量化の課題: DNA 損傷に関する定性データは提供されますが、定量分析はソフトウェアと画像分析技術に大きく依存します。
- 実験条件: 結果は電気泳動時間や pH などの要因に影響される可能性があるため、実験条件を注意深く制御する必要があります。
制限事項
Comet Assay は、DNA 損傷と修復の検出における柔軟性と高感度により、生物医学研究、環境科学、医薬品開発において非常に貴重なツールです。北京流儀生物技術有限公司 (流儀バイオテクノロジー)コメットアッセイ用の水平型電気泳動チャンバーを提供します。について話し合うために私たちと連絡することを歓迎しますコメットアッセイプロトコル。
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投稿日時: 2024 年 9 月 20 日